產(chǎn)品名稱:標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) NIST SRM 2366a - 巨細(xì)胞病毒DNA(用于DNA測量)
英文名稱:Cytomegalovirus DNA (TowneΔ147?BAC) for DNA Measurements
品牌:美國NIST標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
運輸信息:干冰
產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 貨期 | 銷售價 | 您的折扣價 |
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SRM 2366a | 1 vial x 150 μL | 6周 | 11415 | 立即咨詢 |
NIST SRM 2366a - 巨細(xì)胞病毒DNA 旨在用于為每個樣本體積中巨細(xì)胞病毒 (CMV) 可擴增基因組的拷貝數(shù)指定一個值。 當(dāng)用于分配時,實際的 CMV 校準(zhǔn)材料 NIST SRM 2366a 可以提供對國際單位制 (SI) 組織或流體(如血漿)中 CMV 病毒載量測量結(jié)果的可追溯性。
一個單元的 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) NIST SRM 2366a - 巨細(xì)胞病毒DNA 由一個無菌的 0.5 mL 全氟烷氧基 (PFA) 含氟聚合物小瓶組成,其中包含大約 150 μL 提取的 DNA,溶解在 TE 緩沖液,pH 8.0 中。 TE 緩沖液由 10 mmol/L 2-氨基-2-(羥甲基)-1,3-丙二醇 (Tris) 和 1 mmol/L 乙二胺四乙酸 (EDTA) 四鈉鹽在去離子水中組成。 CMV DNA的形式是細(xì)菌人工染色體——稱為CMV TowneΔ147 BAC——包含Towne菌株CMV的基因組[1,2]。
表 1. SRM 2366a 的 CMV 認(rèn)證拷貝值
這些認(rèn)證值是根據(jù)使用液滴數(shù)字 (ddPCR) 系統(tǒng) [3] 和平均液滴體積的直接測量進行的五次聚合酶鏈反應(yīng) (PCR) 測定的一致結(jié)果確定的。使用高斯隨機效應(yīng)模型 [4] 計算認(rèn)證值及其不確定性。 NIST 認(rèn)證值是 NIST 對其準(zhǔn)確性有最高置信度的值,因為所有已知或可疑的偏差來源都已被調(diào)查或考慮 [5]。
不確定性:
該材料中分析物的真實值預(yù)計在給定的概率區(qū)間內(nèi),置信水平約為 95%。出于不確定性傳播的目的,請使用規(guī)定的 u(X) 或 CV,以最適合您的目的為準(zhǔn);這些值與 60 個自由度相關(guān)。
可追溯性:
認(rèn)證值可追溯至每體積的拷貝數(shù),表示為每微升溶液中可擴增的 CMV 實體數(shù),通過身份確認(rèn)、ddPCR 計數(shù)測量、計數(shù)到實體的 Poisson 端點轉(zhuǎn)換的有效性,用于數(shù)字 PCR 端點[6],以及在 NIST 進行的校準(zhǔn)體積測量。計量溯源性是針對體積的 SI 單位。
認(rèn)證到期:
NIST SRM 2366a - 巨細(xì)胞病毒DNA 的認(rèn)證在指定的測量不確定度范圍內(nèi)有效,直到 2025 年 8 月 1 日,前提是 SRM 按照本證書中的說明進行處理和存儲(參見“處理、存儲和使用說明”) 。如果 SRM 損壞、污染或以其他方式修改,則認(rèn)證無效。
SRM 認(rèn)證的維護:
NIST 將在其認(rèn)證期間監(jiān)控此 SRM。如果在本證書到期前發(fā)生影響認(rèn)證的實質(zhì)性技術(shù)變化,NIST 將通知購買者。注冊(見附表或在線注冊)將有助于通知。
處理、儲存和使用說明
處理: NIST SRM 2366a - 巨細(xì)胞病毒DNA 是一種病毒和細(xì)菌 DNA 源材料。 由于對提取的 DNA 的感染狀態(tài)沒有達成共識,請將 SRM 2366a 作為生物安全處理能夠傳播傳染病的 1 級材料 [7]。 SRM 2366a 和衍生解決方案應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)?、州和?lián)邦法規(guī)進行處理。
儲存:NIST SRM 2366a 小瓶應(yīng)儲存在 2 °C 至 8 °C 之間的黑暗中。 不要凍結(jié)。
使用:在取出樣品等分試樣進行分析之前,小瓶應(yīng)通過倒置混合并離心,而無需打開小瓶蓋。 為使認(rèn)證值有效,打開小瓶后應(yīng)立即取出材料并立即處理。 這些材料可以適當(dāng)稀釋,但必須立即使用。 認(rèn)證值不適用于重新封蓋的小瓶中剩余的任何材料。 不要將任何 DNA 溶液直接暴露在陽光下。
制備與分析
樣品制備:CMV TowneA7 BAC來自新澤西醫(yī)學(xué)院(新澤西州紐瓦克H.朱),在NIST的大腸桿菌(E.coli)細(xì)胞中進行增殖。總DNA(CMV和E.Coli)被分離、純化并重新懸浮在TE緩沖液中。在調(diào)整濃度后,允許材料在4攝氏度的PFA容器中平衡,直到瓶裝。就在裝瓶之前,將瓶子放入層流罩內(nèi),置于室溫下,輕輕混合。將溶液轉(zhuǎn)移到帶有自動移液管的PFA小瓶中,然后蓋上蓋子,貼上標(biāo)簽,并在4℃下儲存。
CMV同源性的確認(rèn):Sanger和下一代測序(NGS)證實SRM 2366a中的CMV DNA與參考序列AY315197.2完全一致。