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CKMM同工酶ERM-AD455保存基質分析

作者:東莞市中億生物科技有限公司   日期:2022-12-01

重組人CKMM同工酶ERM-AD455在不同保存基質中的穩(wěn)定性和互通性觀察:

重組酶應用時對其穩(wěn)定性有嚴格的要求。研 究對酶溶液 -20℃ 冷凍保存的穩(wěn)定性做了初步觀 察,發(fā)現(xiàn)未加穩(wěn)定劑時重組酶活性喪失很快。在含 有 BSA、DTT和 EDTA的基質中保存于 -20℃或在 具以上穩(wěn)定劑基質中加入抗凍劑丙二醇,重組 CKMM同工酶的穩(wěn)定性相對較好,仿 CRM 配方基質中重組酶 的短期 穩(wěn) 定 性 也 較 好,保 存 時 間 與 Roche公 司 產(chǎn) cfas校準品復溶后冷凍保存穩(wěn)定時間接近。一般認 為人血清作為參考品基質其基質效應小,研究將 重組CKMM同工酶保存于人血清中,穩(wěn)定性不好,可能是 人血清中含有蛋白水解酶或抑制物等,更易造成酶 失活。酶的CKMM同工酶ERM-AD455都是凍干品,其穩(wěn)定期長,以凍干 品的形式長期保存酶參考品應該是可行的方法。


 羅氏和中生北控 CK常規(guī)測定方法對 IFCC參 考方法做相關回歸發(fā)現(xiàn),無論在 CKMM同工酶還是在 CK- MB升高組常規(guī)方法與參考方法間具良好的兩兩相 關性,相關系數(shù)大于 0.99。但兩組樣本用羅氏方法 測定的結果比參考方法分別偏高 1.96%和 2.23%, 而中生 北 控 的 方 法 的 測 定 值 比 參 考 方 法 分 別 低 8.63%和 10.29%。顯 然,經(jīng) 過 溯 源 校 準 的 羅 氏 試 劑測定的準確度明顯優(yōu)于只 采 用 K值 輸 入 而 未 經(jīng)校準品校準的中生北控國產(chǎn)試劑。 


研究觀 察 了 保 存 于 自 配 基 質、抗 凍 基 質仿 CKMM同工酶ERM-AD455配方基質和人血清基質中重組 CKMM同工酶的互通 性。結果自制基質和仿 CRM配方基質中的重組酶, 在高、、低不同水平時都具有良好的互通性,而抗 凍基質和人血清基質配方中的重組酶只有位于診斷 限附近的低值有互通性。我們對重組酶的酶動力學 研究發(fā)現(xiàn),底 物 磷 酸 肌 酸 的 米 氏 常 數(shù) (Km)重 組 酶 明顯高于天然酶,因此在現(xiàn)有測定方法下重組酶的 測定上限低于天然酶,這可能是高濃度值互通性差 的重要原因之一


綜合對重組酶穩(wěn)定性和互通性的研究發(fā)現(xiàn),加 入穩(wěn)定劑的類人血清自制基質和仿 CKMM同工酶ERM-AD455 配方基質 中保存的重組酶具有較好的應用前景。為保證其穩(wěn) 定性,需進一步制備凍干品,并觀察凍干品在不同保 存溫度的穩(wěn)定性。該重組酶真正作為 CK候選參考 物質應用于臨床還有許多問題需要解決,包括冷凍 干燥品復溶后的穩(wěn)定性和互通性,將此重組酶作為 參考品并予以賦值用于常規(guī)測定的校準 能否減 小室間變異等,都需要進一步觀察。

東莞市百順生物科技有限公司是BCR/IRMM/ERM的代理商,專業(yè)代理CKMM同工酶ERM-AD455 標準品。



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