來源、準(zhǔn)備和分析
SRM 998 血管緊張素I(人)這是從貝克曼儀器公司,生物產(chǎn)品業(yè)務(wù)(帕洛阿爾托,加利福尼亞州)獲得的。
使用在5000kPa壓力下操作的25cm×0.4cm十八烷基硅烷柱對(duì)該SRM的溶解的25ug樣品進(jìn)行液相色譜。將樣品溶于81份體積為0.1摩爾l的磷酸三乙胺緩沖液(pH 3.5)和19份體積為乙腈的溶液中。
SRM 998 血管緊張素I使用兩種洗脫液溶液:一種是用于溶解SRM的相同組成的溶液;另一種是75體積份緩沖液與25體積份乙腈的溶液。通過在215nm和280nm處測量吸收來監(jiān)測洗脫。在濃度比為81:19時(shí),在215nm處檢測到保留時(shí)間分別為6.6分鐘和12.2分鐘的主峰和副峰,在280nm處僅檢測到主峰。收集與每個(gè)峰對(duì)應(yīng)的材料,在6molL HCI中水解并分析氨基酸組成。主峰的氨基酸含量表明它是SRM 998 血管緊張素I(人)。次要pcak(215nm處吸光度的<1%)不含可檢測的肽物質(zhì)。在這些高效液相色譜條件下,乙酸鹽在溶劑前沿聚集,無法定量。在75∶25的洗脫液比下,在其他波長下未檢測到額外的峰,表明不存在非肽、UV吸收材料。
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