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抗人IgG單克隆抗體RM8671的分子量分析

作者:東莞市中億生物科技有限公司   日期:2022-11-28

抗人IgG單克隆抗體RM 8671是一種在鼠懸浮培養(yǎng)中表達的重組人源化 IgG1κ,并經(jīng)過生物制藥行業(yè)標準的上游和下游純化,以去除工藝相關(guān)的雜質(zhì)。它是通過鏈間和鏈內(nèi)二硫鍵連接的兩條輕鏈和兩條重鏈亞基的約 150 kDa 同源二聚體。抗人IgG單克隆抗體RM 8671分子具有高豐度的 N 末端焦谷氨酰胺化、C 末端賴氨酸剪切和重鏈糖基化。該蛋白質(zhì)還具有低豐度的翻譯后修飾,包括蛋氨酸氧化、脫酰胺和糖化 [1-4]。


抗人IgG單克隆抗體RM 8671完整分子量分析

質(zhì)譜電噴霧離子化源( ESI)可以使完整抗體蛋白帶多個電荷,從而將質(zhì)荷比(m/z)降至質(zhì)譜儀可監(jiān)測的范圍內(nèi)。而對帶多電荷的蛋白質(zhì)譜譜圖進行去卷積處理是完整蛋白質(zhì)分子量測定的首選方法,其與高分辨率質(zhì)譜儀一起使用時,可區(qū)分抗人IgG單克隆抗體糖型與其它翻譯后修飾(PTM)。在進入質(zhì)譜儀之前,色譜分離可用于提高基于MS的完整檢測的通量和靈敏度。反相高效液相色譜(RP - HPLC)和尺寸排阻色譜(SEC)都已成功用于完整的mAb分離檢測[;]。本研究將上述方法應(yīng)用于抗體對照品的分析中,并將實測的分子量與理論分子量進行比較。

mAb的完整分子量解析如表1及圖1所示。圖1A顯示,抗人IgG單克隆抗體完整蛋白所帶電荷狀態(tài)良好。綜合表1和圖1B可知,mAb的主峰(4號峰)是重鏈上攜帶的兩個COF;部分重鏈(5號峰)含有COF/G1F,相對比例為18.3%;小部分抗體兩條重鏈(6號峰)攜帶GIF糖型,其比例為3.1%。相對比例為6.9%的重鏈(2號峰)攜帶COF/COF(COF掉一個HexNAc),極少部分(1.4%)重鏈(1號峰)攜帶的COF/COF掉2個HexNAc??梢姶丝贵w的主要糖型是GOF與GIF。3號峰未解析出,從圖1B插圖可得,其匹配的是主峰的部分,即此峰為主峰的一部分,此現(xiàn)象可能是去卷積ReSpect算法導(dǎo)致的。

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